Efecto neuroprotector de ha-1077 y/o mdg548 en procesos neurodegenerativos asociados al envejecimiento. correlación anatomoclínica entre neuroinflamación, homeostasis lipídica, conducta y eeg.
La edad avanzada es un factor de riesgo para el desarrollo de enfermedades cerebrales y deterioro cognitivo. La esperanza de vida de la población continúa aumentando, y el envejecimiento fisiológico cerebral se suma al proceso causal de la enfermedad. Uno de los grandes retos actuales es investigar y conocer cuáles pueden ser los condicionantes que aceleran y perpetúan tanto la disfunción sináptica como la muerte neuronal.
Objetivos:
- Analizar el efecto conjunto del parkinsonismo y del envejecimiento en: i) comportamiento y EEG; ii) respuesta inflamatoria; y iii) homeostasis lipídica y depósitos de Beta-amiloide;
- Examinar si HA-1077 (inhibidor de ROCK e inhibidor de la polarización de microglía), MDG548 (agonista PPAR-Gamma) o la combinación de ambos:
- ralentiza/n la neurodegeneración en el parkinsonismo;
- inhibe/n fenómenos inflamatorios deletéreos;
- correlaciona/n con mejoría clínica conductual, objetivable por EEG (telemetría); y
- si modifica/n los cambios secundarios a la edad (y al parkinsonismo) en los microdominios de membrana.
- Estudio in vivo: Animales de 10, 26 y 38 meses de edad serán intoxicados agudamente con MPTP y serán tratados con HA-1077 y/o MDG548. Se sacrificarán a las 24, 48 y 72 horas. Se evaluará el efecto en la conducta del tratamiento con HA-1077 y/o MDG548 (en animales jóvenes y añosos tratados o no con MPTP): Se evaluarán cada día con tests motores y de conducta, y con estudios de EEG por telemetría. Cada grupo de animales final/válido será con mínimo una n=6.
- Análisis post mortem (habrá grupos de animales diferenciados para extracción de cerebros congelados así como cerebros fijados para histología cuantitativa). Se estudiará la muerte neuronal, el análisis de inervación y de cantidad de catecolaminas en tejido nigrostriatal, la proporción de microglía activada y parámetros de inflamación (tipo de microglía M1 y M2), las gliapses y los procesos fagocíticos, el estrés oxidativo, la presencia de Beta-amiloide, y el fenotipo de microdominios de membrana, y sus posibles modificaciones postrasduccionales. Como técnicas se utilizarán la cuantificación estereológica por regiones, el análisis confocal de co-localización, Western Blot, HPLC, espectrofotometría de masas con electroespray de ionización y cromatografía, y electroforesis convencional y bidimensional.
Metodología:
En un modelo de roedor diurno (Octodon degus) que desarrolla espontáneamente depósitos cerebrales de Beta-amiloide y Tau con el envejecimiento, se estudiará el efecto de MPTP asociado a la edad tanto in vivo (conducta y EEG) como en el análisis postmortem:
Este proyecto se incluye dentro de una línea de investigación de mayor envergadura (pero este es un nuevo aspecto). Así, en este proyecto en concreto se realizarán los análisis in vivo de conducta y de EEG por telemetría en los 3 grupos de edad, con y sin parkinsonismo, y el efecto del tratamiento con HA-1077 y/o MDG548. Se realizarán los análisis postmortem (en tejido fijado y congelado) correlacionando con los resultados EEG in vivo (asociados al efecto del envejecimiento