Estudio del transcriptoma de embriones porcinos/efectos del fluido oviductal y exosomas oviductales sobre la producción in vitro de embriones porcinos
Durante la estancia con el equipo de Pascal Mermillod en el INRA-Nouzilly (Francia), se realizarán dos actividades de investigación. La primera consistirá en estudiar la influencia del ambiente oviductal sobre la producción in vitro de embriones en la especie porcina (Experimento 1). Paralelamente, se aprenderán técnicas de biología molecular para el estudio del transcriptoma en embriones porcinos. Se estudiará el transcriptoma de los embriones producidos in vitro en el experimento 1, así como de embriones porcinos obtenidos in vivo y sometidos a diferentes condiciones de conservación (Experimento 2), que se enviarán desde la Universidad de Murcia a los laboratorios del INRA para su análisis.
La producción in vitro de embriones porcinos a partir de ovarios obtenidos en matadero es la mejor herramienta para obtener un gran número de embriones para el desarrollo de nuevas biotecnologías tales como la generación de animales transgénicos, la transferencia nuclear o la complementación de blastocistos. A pesar de los avances realizados en este campo durante los últimos años (Gil y cols., 2010), la eficiencia de la producción in vitro de embriones en la especie porcina es muy baja. Uno de las causas es que las condiciones in vitro son muy simples y materialmente limitadas comparadas con las condiciones in vivo.
Actualmente el ambiente oviductal se considera fundamental para mejorar los sistemas de producción in vitro de embriones. En este sentido, el equipo de Pascal Mermillod (1993) ya demostró el efecto beneficioso de las células oviductales sobre el desarrollo in vitro de embriones bovinos. Actualmente el equipo receptor está desarrollando diferentes experimentos sobre el papel del fluido oviductal y los exosomas producidos en el oviducto sobre la producción in vitro de embriones bovinos. Los resultados preliminares que han se han obtenido son positivos, lo que hace pensar que quizá sea una estrategia válida para mejorar la eficiencia de la PIV de embriones también en la especio porcina.
Por otro lado, el sector porcino exige cada día más esfuerzos para desarrollar sistemas de producción competitivos y respetuosos con el bienestar de los animales. Estos esfuerzos se traducen en una mayor tecnificación de las explotaciones, donde el empleo de tecnologías reproductivas innovadoras ocupa un lugar importante. Entre estas tecnologías destaca la transferencia de embriones (TE). Nuestro grupo de investigación es pionero de la técnica de transferencia no quirúrgica en la profundidad de un cuerno uterino, tanto con embriones frescos (Martínez y cols., 2016) como criopreservados (Cuello y cols., 2005; Gomis y cols., 2012). Como resultados de esas investigaciones, hoy en día se dispone de un método práctico y eficiente para transferir por vía no quirúrgica embriones frescos, cultivados durante 24 h o vitrificados (Martínez y cols., 2014).
La utilización de embriones cultivados durante 24 h permite tan sólo el transporte nacional de los embriones desde su origen hasta la granja receptora. Nosotros hemos comprobado que las mórulas permanecen viables a 37ºC durante 48 h sin alcanzar el estadio de blastocisto eclosionado, lo cual es fundamental por razones sanitarias. Esa temperatura limita la conservación de los blastocistos a tan sólo 24 horas, aunque dicho periodo puede aumentarse a 48 horas utilizando temperaturas de 25ºC. En este escenario, nuestra propuesta se dirige a la conservación de mórulas y blastocistos porcinos durante 72 h mediante el empleo de varios medios de conservación y temperaturas que desaceleren el desarrollo embrionario, manteniendo su viabilidad (Experimento 2). El estudio de la calidad de los embriones sometidos a conservación se realizará con varias técnicas entre las que se incluye el estudio del transcriptoma que se realizará en los laboratorios del INRA-Nouzilly en Francia.