Ensayos transcripcionales in vitro e in vivo utilizando el factor de transcripción global crp de e. coli
La actividad se puede describir brevemente en dos partes bien diferenciadas:
- Estudio in vitro: puesta a punto y aprendizaje de la técnica "DNase footprinting" para estudiar cómo se produce la interacción entre el factor de transcripción CRP y la RNA Polimerasa de la bacteria Escherichia coli. Esta interacción ocurre a través de una región superficial de CRP donde se localiza la lisina 100, residuo susceptible de sufrir acetilación como modificación post-traduccional reversible.
- Estudio in vivo: medida cuantitativa de la transcripción que produce CRP y sus mutantes utilizando el sistema chivato β-galactosidasa. Se pondrán diferentes secuencias promotoras con la finalidad de medir la tasa transcripcional que se obtenga con CRP mutado o sin mutar.
Las secuencias promotoras escogidas han sido estudiadas y obtenidas a través de la comparación de secuencia de todos los promotores que este factor de transcripción controla. Se centrará en el estudio de la tasa transcripcional de CRP y sus mutantes con los promotores tipo I y promotores tipo II.
Finalmente, las conclusiones derivadas de los experimentos realizados tanto in vitro como in vivo permitirán dilucidar el papel de la acetilación de la lisina 100 de CRP y cómo ésta afecta a la función del mismo.