La deficiencia de antitrombina (AT) es la causa de hipercoagulabilidad congénita más grave y se trata de un desorden autosómico dominante causado por alteraciones genéticas que afectan a los exones o regiones flanqueantes del gen que codifica la AT: SERPINC1. Sin embargo, es un desorden raro y hasta un 20% de los casos con deficiencia de AT no presentan mutaciones en SERPINC1.

Objetivos

1. Desarrollo de nuevos métodos para el diagnóstico de la deficiencia de AT, especialmente para casos con difícil diagnóstico.
2. Identificación de pacientes con deficiencia transitoria de AT y evaluación de los mecanismos moleculares subyacentes.
3. Identificar nuevas alteraciones moleculares en SERPINC1 y fuera de este gen implicadas en la deficiencia de AT.
4. Identificar nuevos mecanismos de deficiencia de AT y nuevas regiones funcionales así como su potencial implicación pronóstica.
5. Definir la incidencia de la deficiencia de AT en patología trombótica arterial y venosa.

Estudios

Este estudio se sustenta en una de las series más largas de pacientes con deficiencia de AT a nivel mundial (N= 906), reclutada durante 21 años, que incluye 564 pacientes con deficiencia de AT recogidos por nuestro grupo y 342 pacientes Belgas de la Dra. K Jochmans, con quien colaboramos.

Pacientes destacados

• 72 con deficiencias de difícil diagnóstico en los que evaluaremos nuevos métodos diagnósticos;
• 30 con deficiencia transitoria de AT en los que se analizará su base molecular;
• 50 con deficiencia de AT con base molecular desconocida con los métodos de diagnóstico convencionales (secuenciación de Sanger; MLPA y trastornos de glicosilación) en los que se analizarán otros mecanismos moleculares responsables de la deficiencia;
• 32 con deficiencia de AT tipo II sin mutaciones en RCL o HBD en los que se buscarán nuevos dominios funcionales;
• 72 que han presentado trombosis pediátrica en los que se evaluará el mecanismo implicado.

Análisis adicional

Finalmente, el estudio analizará la afectación de la AT en la muestra recogida durante el evento agudo y tras varios meses de dicho evento en 300 pacientes con infarto de miocardio, 150 con infarto cerebral y 300 con trombosis venosa. Como controles disponemos de 300 donantes de sangre sanos y 30 pacientes con trastornos congénitos de glicosilación.

Metodología

1. Estudios funcionales que evalúan: a) actividad (anti-FXa y anti-FIIa); b) Afinidad por heparina mediante crossed-inmunoelectroforesis, cromatografía de afinidad o fluorescencia endógena. 2) Niveles antigénicos, mediante pruebas inmunológicas (laurell, ELISA) o aptámeros. 3) Características bioquímicas (estabilidad conformacional por calorimetría, características electroforéticas en distintas condiciones, etc). 4) Análisis molecular (secuenciación convencional y masiva, MLPA). 5) Modelos de expresión recombinante en células de mamífero que se evaluarán aplicando diferentes metodologías (microscopía, bioquímica, funcionalidad¿?). 6) Sistemas de edición génica tanto para evaluar experimentalmente el efecto de mutaciones identificadas en pacientes como para su posterior corrección (CRISPR-Cas9)

El proyecto está financiado y contamos con los recursos necesarios. Disponemos de resultados preliminares de gran interés. Aborda preguntas originales que generarán resultados de potencial trasferencia diagnóstico y pronóstica.