Regulación de la función de neutrófilos y plaquetas por mir-146a en netosis; consecuencias en trombogénesis y potencial terapéutico
Los miRNA son una familia de genes que juegan un papel determinante en prácticamente todos los procesos fisiológicos y cuya desregulación puede provocar patologías tan diversas como cáncer o enfermedades cardiovasculares. Resultados de nuestro grupo han mostrado cómo determinados miRNA participan en la regulación del sistema hemostático.
Así, hemos demostrado la regulación de factores como el factor tisular (miR-17-92), su inhibidor natural el TFPI (miR-27a/b y miR-494), o el Factor XI (miR-181). Además, de otros miRNA implicados en las variaciones interpersonales de los factores de coagulación hepáticos controlando el factor de transcripción HNF4α (miR-34a y miR-24).
En los últimos años la etiología de la trombosis ha evolucionado y es claro el vínculo entre inflamación, aterosclerosis y trombosis, lo que abre nuevas posibilidades de investigación translacional. Mir-146a, es un miRNA expresado en células inflamatorias que podría jugar un papel activo en el desarrollo de procesos aterotrombóticos.
Recientemente, se ha descrito que los neutrófilos a través de la formación de estructuras llamadas neutrophil extracellular traps (NET) juegan un papel crucial en el desarrollo de trombosis. Así, nuestros resultados preliminares revelan que la deficiencia de miR-146a en un modelo murino o en individuos sanos portadores del polimorfismo rs2431697 que disminuye un 50% los niveles de este miRNA; provoca un aumento de la producción de NET en neutrófilos purificados.
Asimismo, en ratones deficientes en miR-146a sometidos a un estrés inflamatorio aumentan los niveles plasmáticos de NET.
Objetivos
- (i) determinar el papel de miR-146a en el proceso de NETosis y cómo rs2431697, miR-SNP presente en el gen que codifica este miRNA y que reduce sus niveles, puede influir en el desarrollo de trombosis en pacientes con patología protrombótica;
- (ii) investigar la contribución de miR-146a plaquetario como nexo entre NETosis y trombosis
- (iii) evaluar la potencial acción terapéutica de miR-146a en aterotrombosis.
Para ello, analizaremos el efecto de la deficiencia de miR-146a en la capacidad intrínseca de los neutrófilos para formar NET empleando un modelo murino deficiente para este miRNA y también un modelo celular humano deficiente en miR-146a generado por CRISPR-cas9. Valoraremos diferentes marcadores de NETosis (DNA, elastasa, mieloperoxidasa, histona 3 citrulinada) tras activación de neutrófilos purificados con PMA.
Estudiaremos el impacto de rs2431697 en la formación de NET en neutrófilos de pacientes con fibrilación auricular. Realizaremos estudios de asociación entre marcadores plasmáticos de NETosis y la presencia de rs2431697 en el desarrollo de eventos trombóticos en esta cohorte.
Valoraremos la función plaquetaria en ratones deficientes en miR-146a y el impacto en la formación de NET in vivo en ratones miR-146a-/- y en pacientes. Estudiaremos el papel de la interacción de factor von Willebrand con NET y su relación con la señalización en neutrófilos y plaquetas.
Investigaremos nuevas dianas de miR-146a en plaquetas y neutrófilos implicadas en la formación de NET por RNA-seq comparando la expresión de transcritos de muestras de ratones miR-146a-/- vs. WT.
Por un lado este proyecto, ayudaría a refinar la estratificación clínica de riesgo de estos pacientes lo que repercutiría en su manejo clínico y bienestar; y por otro lado ayudaria a obtener nuevas aproximaciones terapéuticas e identificar potenciales dianas antiinflamatorias.