Corrección de la mutación en rac2 como tratamiento frente a la cardiotoxicidad por antraciclinas: uso de vectores aav9 como terapia génica en pacientes afectados
Objetivos y metodología:
- Generación, caracterización y transformación de células de pluripotencia inducida (iPSs) a cardiomiocitos a partir de fibroblastos dermales, mediante:
- (a) en fibroblastos dermales, reprogramación genética por expresión retroviral de Oct 3/4, Sox2, Klf4 y c-Myc
- (b) diferenciación de iPSs a iPs-CM mediante procedimientos estandarizados
- (c) caracterización de células iPs e iPSCM por RT-qPCR, western blot y técnicas espectrofluorométricas
- Caracterización de la implicación de la mutación rac2 -/- en la cardiotoxicidad por las antraciclinas, mediante el uso de vectores CRISPR/Cas9, usando células diferenciadas de tipo iPs-CM sometidas a protocolos de simulación de daño por antraciclinas. Se emplearán técnicas de RT-qPCR, western blot, HPLC y espectrofluorimetría confocal.
- Evaluar si la corrección de la mutación rac2 -/- previene de la cardiotoxicidad inducida por doxorrubicina en un modelo in vivo, mediante el uso de un modelo animal experimental de tipo comercial de Jackson Laboratory, cuya mutación es equivalente a la rac2 -/- en humano y el uso de vectores tipo AAV9. Se medirán parámetros relacionados con el remodelado cardíaco: estrés, inflamación, hipertrófia, apoptosis, · · · por RT-qPCR, western blot e inmunoensayo.