Los genes implicados en la metilación de adeninas del DNA del hongo Mucoral Mucor circinelloides, causante de la mucormicosis, se han identificado y su función en la metilación del DNA se está caracterizando. Por otro lado, se ha generado una estirpe bioluminiscente de este hongo.

CRISPR-Cas se utilizará para generar mutantes en los genes principales de la metilación de adeninas.

Tarea 1: Generación de mutantes

El investigador postdoctoral contratado generará las construcciones necesarias, realizará las transformaciones y caracterizará genotípicamente y fenotípicamente los transformantes. Como resultado de esta tarea se debe disponer de al menos dos mutantes independientes para cada gen.

Tarea 2: Visualización del proceso de infección en ratones vivos

Se establecerá el procedimiento para analizar el proceso de infección en ratones vivos basado en la visualización del crecimiento e invasión de los tejidos animales siguiendo la bioluminiscencia emitida por el hongo.

Tarea 3: Análisis de capacidad infectiva de los mutantes generados

Las estirpes generadas en la tarea 1, junto con el procedimiento de visualización establecido en la tarea 2, permitirá analizar la capacidad infectiva de los mutantes generados en los genes de metilación determinando si está modificación epigenética afecta al proceso de infección y qué paso del proceso de infección está afectado.

Es probable que los mutantes en los genes de metilación de adeninas se vean afectados en la virulencia debido al elevado nivel de metilación de adeninas en los hongos Mucorales.

Tarea 4: Estudio in vitro de inhibición de las metilasas de adeninas

Se comprobará si algunas de las moléculas descritas como inhibidores de las metilasas de adeninas bloquean in vitro el crecimiento de M. circinelloides. De ser así, se determinarán las concentraciones mínimas inhibitorias (CMI), fungicidas (CMF) y efectivas (CME), siguiendo la metodología descrita por el Clinical Laboratory Standard Institute. Los estudios sobre actividad in vitro se complementarán, en su caso, con el estudio de cinéticas de mortalidad (time kill).

Tarea 5: Estudios de eficacia in vivo utilizando la estirpe silvestre bioluminiscente

Una vez demostrada la actividad antifúngica in vitro, se realizarán los estudios de eficacia in vivo utilizando la estirpe silvestre bioluminiscente. La eficacia del tratamiento se evaluará mediante análisis de la bioluminiscencia in vivo. El resultado de esta tarea podría resultar en la identificación de moléculas que puedan servir de partida para el desarrollo de antifúngicos contra la mucormicosis.