Valoración pronostica a largo plazo de la deteccion y caracterizacion de ctcs mediante biopsia líquida microfluídica en pacientes con hepatocarcinoma en lista de espera de trasplante hepático. pi18/01302
Recibir formación desde la cabecera del paciente, donde junto con el equipo médico estudiar variables clínicas de pacientes, aprender la influencia de tratamientos y hacer determinaciones ex vivo para estudiar la implicación de las variables estudiadas más orientadas a la enfermedad.
A través de la detección de las CTCs en sangre periférica:
- Enriquecimiento y Cuantificación de CTCs: aislamiento inmunomagnético de las CTCs en gradiente con Ficoll e incubación con partículas magnéticas recubiertas de anticuerpos específicos y su posterior selección magnética en el Sistema IsoFlux
- Aprendizaje de la tinción inmunofluorescente y el uso del microscopio de fluorescencia contabilizando CTCs como células intactas morfológicamente, nucleadas, CK+ / Hoechst + / CD45-
El RNA total de las CTCs aisladas se extraerá con el RNeasy Micro Kit (Qiagen), el DNA de las CTCs a través del uso de columnas de purificación (IsoFlux NGS DNA Kit).
Los RNAs obtenidos de las CTCs, serán transformados a DNA copia (cDNA) y la PCR cuantitativa se llevará a cabo empleando los cDNAs con SYBR Premix Ex Taq (Perfect Real Time) TAKARA y oligos específicos para cada mRNA, en un analizador MyiQ one-color PCR real-time cycler de Bio-Rad.
Formación en el manejo del Spotlight 59 Oncology Panel, con el que podemos testar un total de 59 genes que han demostrado ser clínicamente relevantes en relación con la oncología.
Gestión bases de datos (Cuaderno de Recogida de Datos, bases en SPSSS, etc).
Aprender análisis estadísticos adecuados para cada una de las variables a estudiar.
Aprender a organizar, redactar y discutir todos los resultados obtenidos por el mismo y por el resto del equipo investigador para escribir manuscritos científicos con fin de su publicación en revistas de alto impacto.