Puesta a punto de técnicas de análisis y genotipado de los polimorfismos del gen de la melanopsina (OPN4)
El objetivo de la estancia es la puesta a punto de técnicas de análisis y genotipado de dos polimorfismos del gen de la melanopsina (OPN4), de tipo SNP: rs2675703 (P10L) y rs1079610 (I394T). Estos dos SNP han sido previamente relacionados en humanos con distintos fenotipos en relación al reflejo pupilar ante a un estímulo luminoso, sincronización circadiana y horarios de sueño. Por ello, el aprendizaje de la técnica de análisis y genotipificación de sujetos se considera crucial para el cumplimiento de los objetivos de la tesis y del plan de investigación del solicitante.
Plan de Trabajo
- Extracción de DNA de muestras humanas de saliva, frotis bucal y/o pelo.
- Comprobación de la integridad del DNA extraído (en gel de agarosa).
- Purificación del DNA (correcta absorbancia 260/230 nm y 260/280 nm).
- Amplificación de regiones de interés mediante PCR (primers indicados abajo).
- Genotipado mediante secuenciación directa de las regiones amplificadas.
Primers para secuenciación
- rs2675703 (P10L). F: 3'-AGGAAAGTTGGGAGGCTGAG-5' | R: 3'-GGTCAGGGAAGGCTCTGTG-5'
- rs1079610 (I394T). F: 3'-TGGCTTCTTCCCCCAGTGTA-5' | R: 3'-ATGTGCTTGGTGTGCATTCAG-5'