El objetivo principal de la presente propuesta es la caracterización de la funcionalidad espermática de los cerdos TPC2KO y su capacidad de congelación. Los objetivos específicos son:

1. Caracterización fenotípica de los machos reproductores TPC2KO.
2. Caracterización de la funcionalidad espermática de cerdos.
3. Caracterización de la capacidad de congelación espermática de estos animales.

Para cumplir estos objetivos se realizará control y seguimiento y manejo reproductivo de la colonia de animales editados genéticamente para lo cual se trabajará con 3 verracos por cada uno de los tres grupos de animales con genotipos diferentes: TPC2KO con mutación bialélica, con mutación mono alélica y animales WT que servirá de control. Esto incluye la valoración mensual de testosterona a partir de muestras salivares, la evaluación del espermiograma de las muestras obtenidas semanalmente, valoración de parámetros hematológicos y de bioquímica sanguínea y evaluación ecográfica de los testículos.

El espermiograma incluye el análisis de:

• motilidad asistido por ordenador (CASA)
• morfología y morfometría espermática
• valoraciones por citometría de flujo (actividad mitocondrial, viabilidad, desorden lipídico de membranas, reacción acrosómica, calcio intracelular, etc.)

Estos estudios se complementarán con la evaluación de funcionalidad espermática en condiciones de capacitación, estudio de las proteínas y valoración de antioxidantes y estrés oxidativo en plasma seminal.