RESUMEN: La hemofilia A es una enfermedad congénita recesiva ligada al cromosoma X que causa una deficiencia del Factor VIII (FVIII). El presente proyecto plantea evaluar la validez de la siguiente hipótesis: el uso de un trasplante de células madre mesenquimales (MSCs) de individuos sanos a hemofílicos A, podría inducir una expresión de FVIII suficiente para mejorar las manifestaciones clínicas de la enfermedad.

Objetivo principal: Determinar en ratones con hemofilia A severa, la eficacia terapéutica del trasplante de MSCs de diferente origen.

1. Objetivos específicos:
• Extraer, aislar, tipificar, cultivar y conservar MSCs de membrana amniótica y de médula ósea murinas. Se comprobará su condición de MSCs mediante el estudio por citometría de marcadores específicos de MSCs y comprobación de su capacidad de diferenciación, incluído célula endotelial. Se estudiará la capacidad de producción in vitro de FVIII y factor de vonWillebrand por las células endoteliales diferenciadas de MSCs.
• Estudiar y comparar el efecto terapéutico del trasplante alogénico de MSCs de membrana amniótica y de médula ósea procedentes de ratones no hemofílicos a ratones hemofílicos A, mediante la medida de la actividad plasmática de FVIII in vivo e in vitro a las 1, 2,4, 8 y 12 semanas.
• Estudiar la distribución de las MSCs trasplantadas vía vena porta en los diferentes tejidos, mediante estudio de imagen in vivo y estudio histológico. Estudiar en el tejido hepático la supervivencia y diferenciación in vivo de las MSCs trasplantadas, mediante técnicas de inmunofluorescencia y citometría.