Finalización de los experimentos conducentes a la publicación de los artículos principales de mi tesis doctoral.

Experimentos realizados en colaboración con el equipo del laboratorio de Génétique Moléculaire Neurophysiologie et Comportement, INSERM UMRS 952, CNRS UMR 7224, Université Pierre et Marie Curie de París

Detección de los niveles estriatales de MPP+ mediante HPCL en ratones GRDatcre

Los ratones GRDatcre no expresan el receptor de glucocorticoides (GR) en las neuronas dopaminérgicas. Los resultados de nuestros experimentos anteriores realizados para determinar el efecto de los tratamientos con corticosterona (CORT) en la muerte neuronal dopaminergica inducida por MPTP en ratones GRDatcre, revelan una ausencia de efecto neuroprotector de la CORT, observado en nuestros trabajos anteriores con ratones c57. Este es uno de los resultados más importantes que conforman el artículo The Stimulation of Glucocorticoid Receptor in Dopaminergic Neurons Mediates the Neuroprotective role of Glucocorticoids in Parkinsonism, principal artículo de mi tesis en vía de publicación.

Experimento para detectar los niveles estriatales de MPP+ mediante HPLC en ratones GRDatcre

Para completar la parte experimental de este artículo, nos vemos en la necesidad de realizar un experimento para detectar los niveles estriatales de MPP+ mediante HPLC en estos ratones. Para ello, utilizaremos 6 ratones mutantes (GRDatcre) y 6 ratones control (GRfl/fl) a los que intoxicaremos mediante tratamiento sub-crónico con MPTP (una inyección de 30mg/kg de MPTP por día, durante 5 días). A continuación, los ratones serán sacrificados, el cerebro extraído y la región del estriado diseccionada. Las muestras serán procesadas para la determinación de los niveles de MPP+ (metabolito activo del MPTP) según el protocolo descrito en Alvarez-Fischer, D., 2008. El MPP+ será medido con columna de ultravioleta a longitud de onda de 295nm.

Estudio de los niveles de expresión de genes que codifican para citoquinas y proteínas relacionadas con inflamación, en cultivos de microglía que no expresa GR, tras inducción de reacción inflamatoria con LPS

Para completar el segundo artículo que estamos elaborando en colaboración con el grupo receptor (Papel de GR en la regulación de la respuesta inflamatoria inducida por inyección de LPS en el estriado), debemos reafirmar los resultados obtenidos en uno de los experimentos comenzados en mi última estancia en Paris.

Para este trabajo, estableceremos cultivos primarios de microglía a partir de ratones neonatos GRLysCre que no expresan el GR en este tipo celular. Estos cultivos serán expuestos a LPS (100 ng/ml) durante 1 hora. Posteriormente, se extraerá el RNA de las células, a partir del cual se sintetizará el cDNA y se realizarán qPCR para TNF, IL- y TLR4 (Toll like receptor al que se une el LPS).

Los resultados preliminares fueron muy esperanzadores al mostrar un aumento en los niveles de TNF e IL- en los cultivos controles expuestos a LPS; aumento que aparecía multiplicado por 15 en los cultivos mutantes expuestos a LPS; además se observó un aumento en los niveles del receptor TLR4. Con los nuevos experimentos esperamos confirmar estos resultados y poder así incluirlos en la publicación.