Candida albicans es una levadura oportunista que forma parte de la microflora comensal del hombre. En condiciones que alteran las defensas del hospedador, es capaz de diseminarse a órganos internos produciendo infecciones denominadas candidiasis que pueden ser de enorme gravedad. La mayor susceptibilidad corresponde a individuos inmunodeprimidos, por ello, la investigación básica se orienta a potenciar los sistemas de defensa del individuo a través de un mejor conocimiento de los mecanismos que controlan la interacción patógeno-hospedador.

Los macrófagos constituyen la primera línea de defensa del hospedador frente a organismos patógenos. Son capaces de reconocer y eliminar microorganismos a través de receptores presentes en su membrana, y una vez endocitado, el patógeno se destruye gracias a la acción de radicales libres de oxígeno y otros enzimas. Además son capaces de alertar a otras células mediante la presentación antigénica que realizan y de producir un gran número de factores inflamatorios como citoquinas.

El desarrollo de una respuesta inmunitaria implica el reconocimiento del agente patógeno a través de receptores presentes en las células inmunitarias del hospedador. Muchos de ellos reconocen glúcidos de la superficie del hongo, entre ellos la galectina-3, una lectina implicada en el reconocimiento de beta-1,2-manósidos de la superficie de microorganismos capaz de discriminar entre levaduras patógenas (C. albicans) y no patógenas (S. cerevisiae). Está implicada en la fagocitosis mediada por macrófagos aunque su asociación con la membrana no está muy clara hasta el momento.

Los siglecs son receptores tipo lectina presentes en células del sistema inmunitario que podrían tener un papel importante en la regulación del sistema inmunitario. El siglec-3 o CD33 es un marcador relevante de la estirpe mieloide y que reconoce ácidos siálicos normalmente expresados en estructuras propias y ausentes en muchos de los patógenos potenciales. C. albicans también los expresa, pudiendo esto suponer un mecanismo de evasión de la acción del sistema inmunitario.

El trabajo a desarrollar en el laboratorio del Dr. Jouault, consistirá en el estudio de la participación de ambos receptores celulares en el reconocimiento de la levadura C. albicans, mediante la consecución de los siguientes objetivos:

1. Estudiar si CD33 reconoce específicamente la levadura C. albicans. Para llevarlo a cabo se transfectarán mediante lipofectamina células HEK293T que son CD33-, con una construcción génica conteniendo el cDNA que lo codifica (elaborada y disponible en nuestro laboratorio) y se estudiará la capacidad de unión de C. albicans a su superficie mediante citometría de flujo.

2- Determinar la naturaleza de las moléculas presentes en la pared de C. albicans que interaccionan con los receptores Gal-3 y CD33. Para ello se realizarán ensayos de unión de células HEK293T transfectadas con CD33 o Gal-3, con moléculas expresadas en la superficie de C. albicans de diferentes procedencias: glicoproteínas purificadas directamente de la pared de esta levadura, o generados mediante transformación de la bacteria E. coli o glúcidos generados de forma sintética. Estos compuestos están disponibles en el laboratorio del Dr. Jouault.

3- Poner a punto la técnica de transfección mediante lentivirus en macrófagos y líneas celulares humanas, para poder estudiar posteriormente el efecto de la sobreexpresión o silenciamiento de los receptores Gal-3 y CD33, que son objetivos de mi proyecto de tesis.