Construcción de microrreactores empleando lipasas termofílicas con aplicaciones comerciales.
En el Centro de Biocatálisis de la Universidad de Exeter se está llevando a cabo una investigación que implica el uso de sistemas de microrreactores para la inmovilización de enzimas y el uso de sistemas desarrollados para el análisis de la actividad de enzimas frente a una amplia gama de sustratos. Sistemas de microrreactores se utilizan para la inmovilización y determinación de la actividad de L-aminoacilasa de Thermococcus litoralis y β-lactamasa de Sulfolobus solfataricus en los microrreactores que han sido diseñados y construidos como parte de la investigación. Tipo chip y tipo columna capilar son dos tipos de microrreactores diseñados y empleados.
Las enzimas libres han sido entrecruzadas con una estructura monolítica en los canales de los microrreactores de chip y enzimas entrecruzadas se han empaquetado dentro de la sílice porosa de reactores de columna capilar. Las actividades a realizar durante el periodo de esta estancia se encuadran dentro de esta línea de investigación y se pueden agrupar en las siguientes etapas:
- Partiendo de los estudios ya realizados en el centro de destino referentes a la clonación y sobre-expresión de enzimas en Escherichia coli, se llevará a cabo el crecimiento de células que contienen el vector de expresión con el gen de interés, así como la purificación de la proteína obtenida mediante cromatografía de afinidad de níquel.
- Inmovilización de la proteína purificada mediante cross-linking con soportes poliméricos y/o mediante agregados sobre monolitos.
- Empleo de microrreactores para la búsqueda, selección y estudio de diferentes sustratos adecuados para la enzima.
Bibliografía:
- Ngamsom, B., Hickey, A.M., Greenway, G.M., Littlechild, J.A., Watts, P., Wiles, C.. Development of a High Throughput Screening Tool for Biotransformations Utilising a Thermophilic L-aminoacylase Enzyme. J Mol Catal B-enzym, 63, 81-86, 2010.
- Hickey, A.M., Ngamsom, B., Wiles, C., Greenway, G.M., Watts, P., Littlechild, J.A.. A microreactor for the study of biotransformations by a cross-linked gamma lactamase enzyme. Biotechnology Journal, 4, 510-516, 2009