Los objetivos de la estancia son determinar la correlación existente entre la expresión génica y proteica de las citoquinas IL-1, TNF-alfa e IL-6 para valorar el desarrollo de una regulación post-transcripcional tras la infección o vacunación con el virus del PRRS en animales inoculados con diferentes cepas del virus: la cepa estándar del genotipo europeo virus del PRRS (cepa LV) con dos cepas de campo (SU-1, de alta virulencia, y 215-06, de moderada virulencia) y con una cepa vacunal (atenuada).

Muestras y métodos

Para llevar a cabo el trabajo previsto durante la estancia, en las muestras de pulmón, tonsila, nódulos linfáticos retrofaríngeo y mediastínico, médula ósea y bazo de los cinco grupos (control, vacunados, virus Lelystad, cepa de alta virulencia y cepa de moderada virulencia) estudiaremos la expresión génica del virus del PRRS y de IL-1, TNF-alfa e IL-6 a partir de muestras fijadas por congelación. Para ello se partirán de cortes de aproximadamente 10 µm de grosor que serán evaluados mediante Microdisección por Captura con Láser (LCM, Laser Capture Microdissection), disponible en las instalaciones del AHVLA. A partir de estos cortes se evaluará la expresión génica diferencial en zonas del pulmón con o sin lesión dentro de un mismo animal y con respecto a los animales control, así como las diferencias existentes entre las distintas estructuras tisulares de los órganos linfoides. Las zonas seleccionadas para el estudio serán sometidas a la extracción del ARNm para cuantificar, a través de una RT-PCR cuantitativa a tiempo real, los cambios experimentados en la expresión génica del virus del PRRS y de las diferentes citoquinas estudiadas.