En estudios realizados para capacitar espermatozoides equinos in vitro se ha evidenciado bajo nivel de fosforilación de tirosina (Hinrichs et al., 2002; Yanagimachi 1994), bajas tasas de exocitosis acrosomal y bajas tasas de penetración espermática cuando se realiza la fecundación in vitro en esta especie. Aunque las cambios moleculares y bioquímicos que conducen a la capacitación aún están bajo estudio, diversas publicaciones, en especies diferentes a la equina, muestran que este proceso está asociado con un incremento del AMPc dependiente de bicarbonato generado por la adenilate ciclasa soluble. El AMPc entonces activa la proteín kinasa A, la cual conduce a que se produzca la fosforilación de proteinas (PT). No obstante, en otros estudios sobre espermatozoides humanos y bovinos, se ha comprobado que el incremento de capacitación y reacción acrosómica es a través de la vía del GMPc (Revelli et al., 2001), y a través de ésta vía, el oxido nítrico (NO) interacciona directamente con la enzima guanilato ciclasa (GC) para estimular la síntesis de la guanosina monofosfato cíclica (cGMP) para regular la acción de las fosfodiesterasas y la proteína kinasa G (Doshi et al., 2012). En el caballo, Mcpartlin et al., (2009) demostraron que la adición del análogo del AMPc, dibutiril cAMP (dbcAMP), y el inhibidor de fosfodiesterasa al medio de capacitación incrementan la tasa de PT en espermatozoides. Sin embargo, en medio no capacitante carente de BSA y/o bicarbonato, los análogos del cAMP fueron incapaces de inducir la PT de las proteínas espermáticas, lo cual es contrario a lo acaecido en otras especies, por lo se plantea la cuestión de si una sola vía molecular está involucrada en los procesos que soportan la capacitación o existen vías alternativas. Apoyando la hipotesis de la existencia de otras rutas durante la capacitación en espermatozoides equinos es uque se ha demostrado la presencia de las tres isoformas del enzima responsable de la producción de NO (Ortega-Ferrusola et al., 2009). Por ello, este proyecto se ha diseñado para estudiar rutas alternativas durante el proceso de la capacitación espermática en la especie equina. Concretamente analizaremos el papel del oxido nítrico sobre la capacitación evaluando su efecto por la fosforilación y nitrosilación de proteínas en un medio enriquecido con diferentes componentes que facilitan la capacitación. Utilizaremos un donante de NO y tres inhibidores de las enzimas que participan en su producción.