12/12/2003
Juan Carmelo Gómez Fernández y Senena Corbalán García
Biomembranas.
Bioquímica y Biología Molecular-A
Facultad de Veterinaria
Universidad de Murcia
Murcia
España
La proteína quinasa C (PKC) participa en numerosas funciones fisiológicas a través de distintas rutas de señalización celular. El grupo de las isoenzimas clásicas de la PKC incluye a la PKCα, βI, βII y γ y está regulado por DAG, ésteres de forbol, Ca 2+ y fosfolípidos aniónicos.
La intruducción de una insaturación en una de las cadenas de los DAG que forman parte de la membrana modifica la capacidad de activación de la PKCα de manera independiente a la presencia de PS y Ca 2+ .
Los dominios C2 de las isoenzimas clásicas de la PKC muestran afinidades similares por Ca 2+ en ausencia de membranas y el proceso implica la intervención de al menos dos cationes según la espectroscopíade fluorescencia. La presencia de membranas aumentó la afinidad por Ca 2+ . Además, los tres dominios interaccionan de manera distinta con las membranas en presencia de este catión.
Según la calorimetría de titulación isotérmica, estos dominios C2 presentan dos tipos de sitios de unión de Ca 2+ , para enlazar un total de tres cationes. La desnaturalización térmica de estos dominios C2 en presencia de distintas concentraciones de Ca 2+ fue irreversible. La transición se desplazó hacia mayores temperaturas con concentraciones crecientes de Ca 2+, siendo mayor el efecto en presencia de fosfolípidos anióticos, El significado de los ligandos unidos a cada uno de los dominios C2 fue diferente.
La estructura secundaria de estos dominios C2 obtenida mediante FT-IR mostró una elevada proporción de hoja β . La adición de Ca 2+ no modificó la estructura secundaria pero sí aumentó la estabilidad frente a la desnaturalización térmica. La adición de fosfolípidos anióticos provocó cambios en la estructura secundaria de estos dominios C2, así como un mayor efecto protector frente a la desnaturalización térmica. El proceso de desnaturalización de los dominios C2 fue distinto para cada uno.
La PKCα completa presenta una importante contribución de hoja β en su estructura secundaria, según los datos de FT-IR. La adición de distintos ligandos no modificó en gran medida esta estructura secundaria. El proceso de desnaturalización térmica de la PKCα en presencia de distintos ligandos fue similar, salvo con la adición de PMA.
